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技术支持

预装柱用途及简介
更新时间:2015-06-09   点击次数:1799次

      预装柱主要用于纯化蛋白质,高纯度的蛋白洗脱呈现窄峰洗脱条件温和,保护目标蛋白的活性,耐NaOH的清洗,可方便的配合注射器,蠕动泵或连接液相色谱系统使用MBPTrap HP 为纯化带有麦芽糖结合蛋白标记(MBP)的重组蛋白带来了便利。

预装柱简介 

    MBPTrap HP 柱子装有Dextrin Sepharose HP 凝胶。它牢固且又稳定的琼脂糖填料基架能使目标蛋白洗脱呈一狭窄的峰,从而减少了进一步浓缩的需求。

  纯化在物理条件下进行,温和的洗脱方式保护了目标蛋白的活性,其温和的条件甚至可以纯化完整的蛋白复合物。

由于结合的高度专一性,只需一步洗脱即可达到高纯度。

    StrepTrap HP填料方便地提供了通过亲和层析的方法纯化Strep ( II )标记的重组蛋白。这类预装柱内装有StrepTactinTM SepharoseTM HP凝胶。streptavidin经过特殊耦合改造成StrepTactin ,确保了其优的结合特性。它牢固且又稳定的琼脂糖填料基架可带来高分辨率,尖锐集中的洗脱峰和高的重现性。纯化物理条件下进行,且温和的洗脱条件确保了目标蛋白的活性。由于结合的高度专一性,只需一步洗脱即可达到高纯度。

MKF疏水填料与疏水预装柱

    MKF疏水性相互作用色谱柱填料的表面具有弱疏水性特征RPC方法是基于强疏水性作用,而疏水性相互作用色谱(HIC: hydrophobic interaction chromatography)方法则依赖于溶质与填料表面之间弱的疏水性相互作用。在高离子强度的盐水溶液淋洗条件下,蛋白质分子中的疏水性部分与填料表面产生疏水性相互作用而被吸附,当淋洗液的离子强度逐渐降低时,蛋白样品则按其疏水性特征被依次洗脱,疏水性越强,洗脱的时间越长,用此原理来实现分离。其特点是,既可以避免使用含有大量有机溶剂的淋洗体系,又能有效地保持被分离物质的生物活性。

一般来说,生物大分子大都含有或强或弱的疏水区域,在不同环境中,生物样品与各种疏水介质所产生的疏水性相互作用大小亦各不相同,正是由于这种原因,才使HIC分离方法得以建立和实施。MKF的HIC填料,绝大多数是多孔结构的,它们的负载量都比较高,每毫升树脂可负载数十毫克的蛋白样品。以特定物理结构PS-DVB树脂为基质的产品,更适于在很高流速下,快速的精细分离纯化蛋白质等生物样品。
  MKF疏水作用介质有四种类型,它们有不同的化学表面和不同的疏水性,其疏水性强弱程度,依次为苯基>C8>C4>异丙基>醚链

分辨率和选择性

   蛋白质在高盐浓度时吸附在树脂上的吸附强度与树脂疏水性和盐浓度直接相关。选择合适的疏水作用介质,无机盐的用量可以降低到低,活性回收可以大。高疏水性介质常用来分离低疏水性的蛋白。弱疏水性介质常用来纯化疏水性很强的蛋白质比如单克隆抗体膜蛋白,如果这两种蛋白和疏水介质结合的非常牢固会导致低的回收率。

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